Human neutralizing human immunodeficiency virus type 2-specific Fab

傲慢与偏见

Human neutralizing human immunodeficiency virus type 2-specific Fab molecules generated by phage display

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从一个无症状，血清检测HIV-2阳性的HIV隐性患者骨髓淋巴细胞提取RNA，构建Fab抗体库。

经GP125蛋白筛选后，30个Fab抗体中，ELISA检测有10个强阳性。

进一步中和活性检测，6个和同源HIV-2病毒具有中和活性，一个和异源HIV-2病毒株K135具有微弱的交叉中和活性。

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实验部分：
样本来源：1989年在非洲感染HIV-2病毒，1991年PCR检测阳性的50岁男性隐性患者。捐赠骨髓期间没有服药，无症状，CD4细胞计数正常，CD4/CD8=0.67。取5ml骨髓，提取RNA，oligo（dT）反转录为第一链。
分别扩增Fd片段和轻链片段，顺次连接到pCOMB3载体中，电转XL1-BLUE细菌。库容量约为4×10^7。
SB培养基中进行培养，感染噬菌体，进行呈现。

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筛选过程
抗原来源：凝集素纯化的HIV-2 gp125蛋白，生物素化。噬菌体库提前用链霉亲和素磁珠进行预孵育。GP125可以同时和链霉亲和素磁珠以及特异性的噬菌体结合，从而达到筛选的目的。
和抗原不结合的噬菌体理论上也没法结合到磁珠上，从而被洗涤掉。
经过4轮的筛选，得到75倍的富集，ELISA检测和抗原的结合活性，挑选到30个阳性克隆，其中再挑选10个进一步鉴定。

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根据GP125氨基酸序列合成13段短肽。
除了多肽，GNA纯化的gp125，或者HIV-2的gp36蛋白用于ELISA实验，检测无症状捐赠人的血清（5247），骨髓，以及筛选到的10株抗体。
此外，4个健康人血清作为阴性对照。
结果显示有9个多肽和血清（5247）中抗体结合。所有筛选到的Fab和多肽均不结合。

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竞争ELISA检测Fab抗体和gp125蛋白结合特异性：
用游离的，未生物素化的gp125和生物素化的蛋白进行竞争结合，30个Fab单抗中，10个显示和生物素化的gp125结合能受到游离的gp125蛋白抑制作用。
测试蛋白的亲和力低于10^7/mol。

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中和实验
10个Fab抗体分别和 HIV-2SBL6669（同种）, HIV-2K135（异种），SIVsm(异源交叉反应）. 三株抗体进行中和反应.
其中有两株抗体和同源6669株产生中和反应，滴度达到1：40，另一株抗体中和抗体滴度能达到1:80。另外有两个患者的血清作为阳性对照，其中一个即是无症状捐赠者的血清。