背景资料： 雄性特异性抗原(Male specific antigen) 通常也称为雄性特异性弱组织相容性Y抗原(Male specific minor histocompatibility Y antigen) ,又称H-Y抗原,是一组雄性特异性表达的基因产物，在异性间组织移植的排斥反应和性别控制等方面的研究中具有重要的理论和实践意义。
噬菌体抗体库技术是近年来发展起来的以噬菌体展示技术为基础的一种抗体筛选技术。噬菌体展示抗体技术比常规方法制备的抗体的多样性高10^10倍 ,并作为高生产量的系统来分析抗原与抗体的相互作用。
本研究首次采用噬菌体抗体库技术制备H2Y抗体，希望有助于哺乳动物后代的性别控制研究（？）。
Fab 段的轻链和重链Fd 基因的扩增 小鼠重链可变区引物
5′引物5′primer 5′TGG AGG CTT CTC SA G GTG MA G CTK CAS SAR TCW GG 3′
3′引物3′primer 5′TGG GGS TGT YGT ACT A GT TGM RGA GAC RGT GA 3′ 小鼠轻链κ可变区引物
5′引物
P1 5′CAT GGA GCTC GAC ATT GTT GTG ACT CA G GAA TCT 3′
P2 5′CAT GGA GCTC GAC ATT GTG TTG ACG CA G CCG CCC 3′
P3 5′CAT GGA GCTC GAC ATT GTG CTC ACC CAG TCT CCA 3′
P4 5′CAT GGA GCTC GAC ATT SWG ATG ACM CA G TCT CCA 3′
P5 5′CAT GGA GCTC GAC ATT GTS ATG ACC CAG WCT CCA 3′
3′引物3′primer 5′GCG CCG TCT A GA ATT AAC ACT CAT TCT A GA CCG TTT 3′
K= G/ T ,M = A/ C ,S = C/ G,R = A/ G,W = A/ T , Y= C/ T ,B = C/ G/ T ,D = A/ G/ T , H = A/ C/ T ,V = A/ C/ G,Rest riction sites
are X ho ⅠCTCGA G, S pe ⅠACTA GT , S ac ⅠGA GCTC , Xba ⅠTCTA GA
PCR 反应条件为：94 ℃ 15 s ,55 ℃ 50 s ,72 ℃ 1. 5 min ,共进行30 个循环,最后72 ℃延长10 min
以cDNA 第一链为模板，分别以轻链和重链Fd段基因的3′端引物和5′端引物(共6 对) 进行PCR反应，分别扩增出Fd 段和轻链。
显示在约680 bp 处可见明显的扩增条带(如图1 ,图2) ，与理论值相符。其中，轻链扩增出三对，重链扩增出一对。
这个酶切电泳图存在明显的问题有：
1. 和图4同样的问题，酶切后大小条带的亮度和实际不符合，切下来的Fd条带亮度更接近PCR结果。
2. pCOMB3质粒全长4029bp，插入了轻链基因后质粒长4.7KB左右。如果重链基因没有成功插入到轻链基因的质粒中，用Xba I 和X ho I 双酶切后，应该得到的条带是1.7kb（载体PCOMB3上Xba I 和X ho I 两酶切位点之间的片段以及插入的轻链基因）和3kb的条带，而不会是5.3kb的条带。
图中带4和带10的条带和理论值不符合。
发表于 2019-10-7 11:11:45
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