Yellow Fever/Japanese Encephalitis Chimeric Viruses:

傲慢与偏见

小鼠毒力实验：
用3-4周ICR或者C57BL/6小鼠用于评价神经内毒性，神经外毒性，观察3周。
用10000pfu的病毒量（用含5%胎牛血清的PBS稀释）通过脑内注射小鼠。

观察三周，SA14-14-2和YF/JE-S组没有小鼠死亡，存活率100%
而JE-N，YF/JE-N，YF5.2iv则100%致死，其中JE-N组的小鼠存活时间最短(平均存活时间 4天）。
YF/JE-N，YF5.2iv组的小鼠存活时间相似(平均存活时间 7天）。

提高病毒攻击量，脑内注射4周龄的小鼠，YF/JE-S量高达1000000pfu，致死率依旧为0，而YF/JE-N仅10pfu就可以致小鼠达到60%的致死率。大脑皮质/海马区组织切片（10000pfu注射组）显示YF/JE-S组仅有局部炎症，注射后10天，脑内病毒仅能检测到很低的滴度，而YF/JE-N组脑组织切片有明显炎症，坏死。病毒滴度能达到10000000pfu/g脑组织。

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神经外毒性测定
用1000000pfu的病毒量腹腔注射3周龄ICR小鼠或者C57BL/6小鼠。
结果显示YF/JE-S无神经外毒性，YF/JE-N有部分神经外毒性，而JE-N的神经外毒性非常高，致死率100%。

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对嵌合病毒基因组的序列分析：

嵌合病毒和野生株基因组在E基因上的区别如表描述。

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讨论部分笔记：
和之前报道的嵌合型DEN/TBE相似，YF-17D病毒cDNA克隆可以用于表达异源病毒结构蛋白prM-E基因，获得拯救病毒。而YF-17DD骨架上嵌入C-prM-E区基因，不能获得拯救病毒。可能的原因是两种病毒之间的顺式RNA结构不能兼容，比如：YF蛋白酶对JE C/prM结合处不能得到有效加工；包装缺陷；JEV的C蛋白对于YFV NS蛋白驱使的RNA合成有毒性作用。

用免疫沉降实验和噬斑减少中和实验鉴定YF-JE嵌合病毒中JE E蛋白是否保持很好的抗原性。嵌合病毒中的prM和E蛋白能够正确地糖基化，E蛋白存在有JE特异性抗原表位以及黄热病毒交叉反应抗原表位。中和实验的数据也表明JE E蛋白的保护性抗体表位在嵌合病毒中依然保守。推断以嵌合病毒作为疫苗使用能诱导产生JE的特异性中和抗体。

YF/JE-S和YF/JE-N之间对于成年小鼠的神经毒性差异非常显著。之前已经知道JE SA14- 14-2疫苗株和母株SA-14 比较，疫苗株没有神经毒性，两者基因组进行比较，存在一些核苷酸的差异，不能判定具体是哪个蛋白是和毒力相关。本文的毒力实验数据显示prM-E蛋白可能是神经毒力决定蛋白。YF/JE-N嵌合病毒在C57BL/6小鼠中有部分神经外毒性，说明JE E蛋白有和神经外毒性相关的抗原决定簇。YF/JE-N嵌合病毒在ICR小鼠中无神经外毒性，显示了该病毒对不同种属的小鼠易感性不同。

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基因组测序显示YF/JE嵌合病毒在E蛋白有10个位点，prM蛋白有3个位点可能和神经毒力有关。

嵌合病毒YF/JE-S和减毒株SA14-14-2特性很相似，神经毒性大幅下降。SA14-14-2是目前中国广泛使用的乙脑减毒疫苗株，多次免疫可以得到完全的保护效力。，如果嵌合病毒能解决SA14-14-2疫苗株复制效率较低的问题，有可能成为第二代乙脑减毒活疫苗。