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楼主: 黄帮主

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 楼主| 发表于 2024-9-9 14:55:28 | 显示全部楼层
本帖最后由 黄帮主 于 2024-10-10 16:36 编辑

pET-20b(+):3716bp
含pelB信号肽序列,但是pET20b没有lac operator, 即无AATTGTGAGCGGATAACAATT序列,可以不用IPTG进行诱导表达。

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 楼主| 发表于 2024-10-8 20:20:26 | 显示全部楼层
414:pET-21a(+)
5443bp,Amp抗性

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 楼主| 发表于 2024-10-8 21:13:32 | 显示全部楼层
419 pET-30a(+)
5422bp kana抗性

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 楼主| 发表于 2024-10-13 21:57:31 | 显示全部楼层
pET-3A 4640BP


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 楼主| 发表于 2024-11-2 09:43:49 | 显示全部楼层
碱裂解法是基于DNA的变性与复性差异而达到分离目的的。碱性使质粒DNA变性,再将pH值调至中性使其复性,复性的为质粒DNA,而染色体DNA不会复性,缠结成网状物质,通过离心除去。

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 楼主| 发表于 2025-7-23 07:01:25 | 显示全部楼层
金属螯合亲和层析是利用蛋白质表面暴露的一些氨基酸残基和载体之上的金属离子之间的相互作用而进行的亲和纯化。
这些氨基酸残基包括组氨酸、色氨酸、赖氨酸等。组氨酸的咪唑侧链可亲和结合镍、锌和钴等金属离子,在中性和弱碱性条件下带组氨酸标签的目的蛋白可与金属螯合亲和层析柱结合,在低pH下用咪唑竞争洗脱,且6×组氨酸标签只有6个氨基酸,分子量很小,可以根据需要通过酶切去除。
利用金属螯合亲和层析柱的这些特性,将带有His标签的目的蛋白与其它大量杂蛋白分离,并在亲和层析柱上应用凝血酶完成对标签的切割。

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 楼主| 发表于 2025-7-25 22:35:02 | 显示全部楼层
IPTG的作用:
是一种含硫的乳糖类似物。
这种类似物在没有乳糖的条件下,它可以诱导细胞合成β-半乳糖苷酶。所以我们称IPTG为β-半乳糖苷酶的诱导剂,亦即不发生代谢变化的诱导物。
在X-gal显色反应中,β-半乳糖苷酶同样也需要诱导
X-gal:无色的底物,可以被β-半乳糖苷酶切成半乳糖和深蓝色的底物-靛蓝。

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