Development and Characterization of Monoclonal Antibodies to Botulinum

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Development and Characterization of Monoclonal Antibodies to Botulinum Neurotoxin Type E

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肉毒杆菌中毒是由肉毒杆菌分泌的肉毒杆菌神经毒素引起的致死性疾病。不与抗体共接种的小鼠生物测定是检测BoNT的标准方法，但不能区分不同的血清型（A-G）。大多数食源性中毒是由血清型BoNT/A和BoNT/B引起的。BoNT/E爆发最常见于北部沿海地区，与食用受污染的海产品有关。

夹心酶联免疫吸附测定（ELISAs）可用于检测BoNT /E3。通过用BoNT / E3轻链和重链的重组肽片段免疫，筛选到12株针对BoNT /E3的单克隆抗体（mAb），能够与重组肽和全毒素结合，并在Western印迹和夹心ELISA中结果阳性。

最灵敏的三明治ELISA测定法使用一对不同的mAb作为捕获和检测抗体，在标准缓冲液基质中的检出限为0.2 ng/ ml，在鱼制品基质中的检出限为10 ng/ mL。

本文中通过采用两种不同的mAb进行捕获和检测，构建了更加标准化的夹心测定法。针对BoNT /E的单克隆抗体的开发将有助于初步筛选潜在的食品污染，加快诊断速度并减少对实验动物的使用。

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肉毒毒素主要有7个血清型，A-G，此外还有H，X型，目前研究比较少。
所有的肉毒毒素分子量大约都为150kda，两条肽链组成，重链为100Kda，轻链为50KDa。
2016年间，美国食物中肉毒中毒的病例中，90%由A和B型引起，另外10%由E引起，

E型毒素是鱼类，渔业产品，和水体环境，包括土壤海岸线中流行株。

在美国大湖地区的水禽中也发现了BoNT /E爆发，在阿拉斯加，BoNT / E是最常见的血清型，在1950-2016年间占食源性病例的82％。

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不同的BoNT血清型在免疫学上都是不同的，因此可以使用基于抗体的试剂来区分每种血清型。针对的BoNT / E的抗体有，兔PABS，马PABS ，小鼠mAb ，人源化单链可变片段（scFvs），和单域抗体（VHH）。

用于检测食物或者其他生物学样品中BoNT的免疫学方法包括ELISA，电化学发光免疫实验，胶体金，流式，免疫PCR，质谱，免疫抗体捕获等等。

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背景留空白

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材料和方法：
来源于E3/Alaska的全分子肉毒毒素BoNT/E，1mg/mL的肉毒毒素，A–G。
抗-BoNT/E兔血清，购于Metabiologics Inc. (Madison, WI, USA).
缺陷型BoNT/E3，HRP标记山羊抗小鼠IgG，
各种检测食品。

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提取肉毒杆菌E3/Alaska 基因组序列，扩增出轻重链的不同片段。插入到 pGS-21a载体中，构建GST融合表达载体。


分别用重组蛋白recBoNT-LC-GST, recBoNT-HCP1-GST, 以及recBoNT-HCP5-GST免疫小鼠，分别代表轻链，跨膜区，和受体结合区。

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采用两种融合筛选的杂交瘤技术筛选肉毒毒素抗体